Resumen Introducción: La alteración de la vitamina D es un factor de riesgo para enfermar de tuberculosis (TBC). Objetivo: Evaluar la concentración pulmonar y sérica del compuesto 25-hidroxi-vitamina D (25OHD) en pacientes con y sin TBC pulmonar. Metodología: Estudio de dos etapas: la primera parte fue de corte transversal, retrospectiva, y la segunda prospectiva. Se incluyeron > 18 años a los que se les realizó fibrobroncoscopia por sospecha de TBC pulmonar y en quienes se confirmó la infección. Se tomaron como controles a pacientes con otro tipo de infección no TBC, y enfermedades no infecciosas para la primera etapa y controles infecciosos sin TBC en la fase prospectiva. La medición de 25OHD se realizó mediante ELFA (ensayo de fluorescencia ligado a enzima). Se empleó la prueba de Kruskal-Wallis para evaluar asociación considerando significativo un valor de p < 0,05. Los datos se procesaron con el programa SPSS versión 23. Resultados: La muestra total fue de 77 pacientes (35 en la primera etapa y 42 en la segunda). Las características entre los grupos fueron homogéneas. Las concentraciones en suero (segunda fase) como en el lavado bronco-alveolar (primera y segunda fase) de 25OHD fueron más bajas en pacientes con TBC comparado con los controles e independientes de la concentración de calcio sérico (suero: 22,4 ng/mL vs 33 ng/mL, p = 0,006 y lavado bronco-alveolar: 9,7 ng/mL vs 12,2 ng/mL; p = 0,012). Conclusiones: Hubo una diferencia significativa entre las concentraciones de 25OHD, tanto en suero como en lavado bronco-alveolar, en pacientes con TBC pulmonar con relación a sus controles.